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細胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術(shù)，細胞培養(yǎng)到一定程度的時候必須借助細胞耗材方能達到細胞生長所需的條件，富道細胞為大家分享一下如何使用細胞培養(yǎng)瓶進行貼壁細胞傳代。

貼壁細胞細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對細胞進行傳代擴增。

對于貼壁不太緊的細胞如293細胞，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般過程為 （以下操作均按無菌操作的要求進行）：

將長成致密單層細胞的細胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去； 加入0.25％胰酶溶液，視細胞培養(yǎng)瓶的大小加入體積為0.5ml或更多，以使充分浸潤； 一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察細胞培養(yǎng)瓶壁半透明的細胞層，當(dāng)見到出現(xiàn)細針孔空隙時，棄去胰酶溶液，并加入適量的細胞培養(yǎng)液終止消化；視實驗要求分入多個細胞培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，一般為一傳二到一傳四的比例。

這里，胰酶消化的程度是一個關(guān)鍵：消化過度則對細胞的活性損傷較大，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細胞難于從細胞培養(yǎng)瓶瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細胞活性。 影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養(yǎng) 瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

這就是富道細胞為大家分享的如何使用細胞培養(yǎng)瓶進行貼壁細胞傳代，希望對大家有所幫助。