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細(xì)胞搖瓶多用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，常見規(guī)格包括125ml/250ml/500ml/1000ml等。在培養(yǎng)細(xì)胞時我們會可能會遇到細(xì)胞成簇的情況，這是什么原因?qū)е碌哪兀?/span>

1、細(xì)胞搖瓶培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。因為鈣離子和鎂離子會影響胰酶的消化能力，導(dǎo)致胰酶消化能力下降，培養(yǎng)細(xì)胞時，消化的細(xì)胞數(shù)量有限，加上細(xì)胞的密度依賴性，所以細(xì)胞培養(yǎng)時最好使用不含有鈣鎂離子的PBS緩沖液。這個時候我們可以用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。

2、支原體污染，這是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種污染，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發(fā)覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細(xì)胞會持續(xù)受到影響，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

此外，如果細(xì)胞搖瓶內(nèi)細(xì)胞成簇還有可能是蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解引起的DNA污染，這個時候我們可以用DNase I處理細(xì)胞。總之，細(xì)胞成簇的原因是多方面的，我們需要分析具體情況，找出原因采取相應(yīng)的解決辦法。