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細(xì)胞工廠是近幾十年逐步出現(xiàn)在國內(nèi)科研室和疫苗生產(chǎn)廠家的視線中，細(xì)胞培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域，通過體外培養(yǎng)，可以獲得單一種類的細(xì)胞，今天根據(jù)細(xì)胞工廠廠家來跟大家分享一下使用細(xì)胞工廠來培養(yǎng)細(xì)胞時內(nèi)部細(xì)胞不貼壁該怎么辦

細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。

解決辦法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。

缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會下降很多。

解決辦法：更換血清。

支原體或細(xì)菌的污染。

解決辦法：分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

培養(yǎng)液配置、儲存不當(dāng)，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。

解決辦法：使用無菌醋酸溶液調(diào)整 pH 值或充入無菌 CO2。

復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

解決辦法：啟用新的保種細(xì)胞。

如果細(xì)胞比較珍貴或沒有備份細(xì)胞

解決辦法：可嘗試將不貼壁細(xì)胞收集離心，再用 PBS 將沉淀清洗一遍，離心后的沉淀加入胰酶重新消化接種，同時提高血清濃度到 15%~20%。

這就是細(xì)胞工廠內(nèi)細(xì)胞不貼壁的原因了，希望對大家有所幫助。