細(xì)胞工廠多用于貼壁細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng),在細(xì)胞生長到一定程度之后就需要收獲細(xì)胞了。由于貼壁細(xì)胞是貼附在容器的底部生長,因此在收獲細(xì)胞的時(shí)候需要借助胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化之后再收獲。
胰酶屬于異種蛋白酶,可以將細(xì)胞膜上和細(xì)胞培養(yǎng)瓶結(jié)合的蛋白質(zhì)降解。通過在特定位置上降解蛋白,使蛋白間結(jié)合處蛋白降解,細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架張力作用下成為球形,從而使細(xì)胞分開。消化細(xì)胞的具體的步驟如下:
1、首先我們需要將細(xì)胞工廠內(nèi)的培養(yǎng)液導(dǎo)出,這時(shí)候我們可以借助專用的管路系統(tǒng),以減少細(xì)胞外源污染的風(fēng)險(xiǎn);
2、導(dǎo)出培養(yǎng)液后,加入適量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過細(xì)胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加或減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同),依次搖晃容器終止消化,前后左右各10次,靜置觀察細(xì)胞解離后效果。
3、收集細(xì)胞懸液至儲液桶即可。
在利用胰酶消化細(xì)胞工廠中細(xì)胞的時(shí)候,我們需要注意控制好消化時(shí)間,防止因?yàn)橄^度而影響細(xì)胞的活性,影響后期的實(shí)驗(yàn)。