離心管作為一種使用量非常大的一次性耗材,在微生物學(xué)、組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域均有廣泛的應(yīng)用。在免疫共沉淀實驗中,它也是一種必需品。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。離心管在免疫共沉淀實驗中主要用于細胞裂解緩沖液的離心,以得到實驗所需物質(zhì)。
當(dāng)細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在agarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的,符合體內(nèi)實際情況,得到的結(jié)果可信度高,常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
在離心的時候注意控制好離心速度,免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至離心管的底部;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘。再對得到的物質(zhì)進行質(zhì)譜分析即可。
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