我們立即棄去細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,以PBS潤洗2~3次,加入胰酶處理至細胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時棄去胰酶,加入PBS輕輕潤洗1遍;
在細胞培養(yǎng)瓶中加入20×雙抗,浸泡細胞3~5min,棄去雙抗,并加入新鮮的完全培養(yǎng)基(含10×雙抗)培養(yǎng)12h;
12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基(含10×雙抗),傳代時以較小轉(zhuǎn)速離心(如平時以1000r/min離心,則可降為800~900r/min離心),仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)。
若第二代后鏡下找不到細菌,則第三代起可正常培養(yǎng)。正常培養(yǎng)48h后無反彈則可認為污染已清除。
若為霉菌污染,在以PBS潤洗2~3遍后換液,無需加入高濃度雙抗。培養(yǎng)48h后污染未再次出現(xiàn)即可。
若為真菌污染,在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B(兩性霉素B有細胞毒性,不推薦使用),也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng),污染控制后改用150μg/mL培養(yǎng)2~3代。
若懷疑支原體污染,則可進行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑(如:某恒生物)。也可購買環(huán)丙沙星注射液,于超凈臺內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中,以20μg/mL濃度2代后改用10μg/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。
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