我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時(shí)由于RAW 264.7細(xì)胞可以作為很多基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和藥理學(xué)領(lǐng)域的研究模型,所以每個(gè)人的研究方向不同,所以細(xì)胞培養(yǎng)方式也有差別,今天富道細(xì)胞來(lái)跟大家說(shuō)一下我們對(duì)該細(xì)胞的一些小心得。
由于該細(xì)胞生長(zhǎng)快,條件好時(shí)24h內(nèi)能分裂兩次至少。而且喜歡扎堆,所以2天就要傳代,不是真的空間不夠,而是細(xì)胞都擠在一起。所以,如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶里細(xì)胞密度小,培養(yǎng)基2天還是很好,可是細(xì)胞卻扎堆,需要進(jìn)行傳代了,就會(huì)造成培養(yǎng)基的浪費(fèi),所有我們可以保持瓶中的細(xì)胞密度在20~40%左右,分裂2~3次就傳代,這時(shí)剛好培養(yǎng)基發(fā)黃。細(xì)胞太少就浪費(fèi)培養(yǎng)基了。
這個(gè)細(xì)胞是巨噬細(xì)胞,就是M0,未分化的巨噬細(xì)胞,外觀(guān)是圓形高折光,貼壁非???,10min內(nèi)能貼80%,也容易脫落,無(wú)胰酶拍打200下或者胰酶室溫30s輕輕拍打都能下來(lái)60~80%,不過(guò)無(wú)胰酶吹打是吹不下來(lái)的。
如果培養(yǎng)條件不好,它會(huì)分化,變成多邊形,從高折光的小圓亮點(diǎn)變成灰色的一小片,變得粘附非常緊,所以我覺(jué)得應(yīng)該控制消化時(shí)間和拍打力度,不要過(guò)分追求把所有細(xì)胞都弄下來(lái),這樣一來(lái)影響狀態(tài)好的未分化圓形細(xì)胞活力,另一方面會(huì)把狀態(tài)不好的分化細(xì)胞弄下來(lái),不如縮短胰酶時(shí)間到1min內(nèi),把分化過(guò)的高粘附細(xì)胞留在瓶里,正好起到對(duì)細(xì)胞分化狀態(tài)的選擇作用。
我們進(jìn)行傳代時(shí)首先無(wú)胰酶拍打,能弄下來(lái)約50%的細(xì)胞,然后加胰酶拍打30s,鏡下觀(guān)察,一般30s剛剛好,剩下未脫落的都是分化的形態(tài)不好的細(xì)胞,這種細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),如果要回到圓形,可以用胰酶消化后傳代。