細(xì)胞搖瓶作為一種經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠的細(xì)胞培養(yǎng)工具，在生物制藥、疫苗制備、細(xì)胞與基因治療等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，其中在慢病毒轉(zhuǎn)染中，也會(huì)用到這種容器。
慢病毒載體是以HIV-1為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，被廣泛地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中。細(xì)胞搖瓶主要用于慢病毒轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，其步驟如下：
1.在2×105/ml懸浮細(xì)胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒，充分混勻。37℃孵育?；蛘?50g室溫離心4小時(shí)(選作，部分難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系采用此步驟可以提高轉(zhuǎn)染效率)。
2.(對(duì)polybrene毒性敏感的細(xì)胞選作此步驟)4小時(shí)后(或離心結(jié)束后)加入等體積新鮮培養(yǎng)基以稀釋polybrene。
3.繼續(xù)培養(yǎng)3-4天。中間視細(xì)胞生長(zhǎng)情況可傳代或換液。
在使用細(xì)胞搖瓶進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染時(shí)一定要注意感染時(shí)的培養(yǎng)基盡量少些；每1ml的培養(yǎng)基中加入5-10ul的Polybrene（儲(chǔ)存液濃度為2mg/ml ），可以提高效率約3-5倍。不過病毒感染效率的問題都是相對(duì)的，達(dá)到自己的研究目的即可。
