我們在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或原代細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。今天就跟大家分享一下凍存管凍存原代細(xì)胞技術(shù)。
首先我們要知道我們在細(xì)胞凍存的時(shí)候,是有一些先決條件的,比如我們在觀察原代細(xì)胞時(shí)要選用生長數(shù)量好且多的細(xì)胞,而且在使用凍存管進(jìn)行凍存之前還需在前一天換液。而且我們在使用凍存管進(jìn)行凍存貼壁細(xì)胞的時(shí)候需要用胰酶將細(xì)胞消化下來,后續(xù)將懸液置于離心管之中進(jìn)行離心之后,在將清液棄用,后續(xù)沉淀的時(shí)候可以加培養(yǎng)液(一般為二甲亞砜或甘油的培養(yǎng)基)。
后續(xù)需要進(jìn)行懸液分管,在分管的時(shí)候切記封口一定要嚴(yán),且不能超過凍存管的容量,否則會(huì)在復(fù)蘇和凍存的時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn)管壁爆裂。在密封好凍存管之后需要進(jìn)行詳細(xì)記錄,如使用sbs凍存管也需要及時(shí)進(jìn)行錄入詳細(xì)信息,或者用記號筆標(biāo)明細(xì)胞種類和凍存日期。
需要注意的是使用凍存管凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,但是是以一定的冷卻速度凍存,最終保存于液氮中,可以按照以下順序進(jìn)行降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮,在這種極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。這就是給大家分享的凍存管凍存原代細(xì)胞技術(shù)了,希望對大家有所幫助。