合適的PH值是細(xì)胞生長的必要條件,在利用細(xì)胞搖瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),我們有時(shí)候會遇到培養(yǎng)液PH值變化太快的情況,這樣對細(xì)胞的生長非常不利。那么,這是什么原因造成的,我們又該如何應(yīng)對呢?
1、二氧化碳張力不對:按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度,2.0 g/L到3.7 g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%?;蛘吒挠貌灰蕾嘋O2培養(yǎng)液。
2、瓶蓋擰得太緊:松開瓶蓋1/4圈。
3、NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足:加HEPES緩沖液至10到25 mm 終濃度
4、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確:在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液
5、細(xì)菌、酵母或真菌污染:如果細(xì)胞搖瓶中的培養(yǎng)液受到污染,也會導(dǎo)致PH值的變化,這個時(shí)候就需要視污染情況而定,選擇丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
大多數(shù)細(xì)胞適于在pH7.2~7.4條件下生長,低于pH6.8或高于pH7.6對細(xì)胞有害,甚至退變或死亡。各種細(xì)胞對pH值的要求不盡相同,一般原代培養(yǎng)細(xì)胞對pH值的堿性的耐受比對酸性的耐受差,偏酸的環(huán)境比偏堿的環(huán)境對細(xì)胞生長有利。如果細(xì)胞搖瓶培養(yǎng)液中的PH值變化太快,我們需要分析具體原因,然后再進(jìn)行下一步的操作。