在培養(yǎng)細胞時,我們經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)瓶的內部有黑點,這些黑點很有可能是受到污染而出現(xiàn)的,那么,如果瓶內出現(xiàn)黑點,我們該如何處理呢?
瓶子內部出現(xiàn)黑點,我們首先要判斷這些黑點是不是污染,可以通過黑點的大小、形狀、運行速度等方面進行判斷,如果判定黑點是污染,我們可以參照以下方法進行處理:
如果是懸浮細胞:手機細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的細胞培養(yǎng)瓶。如果是貼壁細胞:將細胞用PBS潤洗2-3遍,洗的時候,輕輕拍打瓶體,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,然后再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。
另外,如果細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)液變渾濁,則說明細菌污染已經(jīng)比較嚴重,請及時將細胞處理后丟棄。避免出現(xiàn)黑點要從培養(yǎng)基PH值、水質、器皿的清潔等多方面進行注意,在消化細胞的時候要掌握好時間,防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片。
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