細胞培養(yǎng)試驗對環(huán)境、耗材等有嚴格的要求,如果細胞培養(yǎng)瓶中含有細菌內毒素,將影響細胞的生長甚至導致死亡。那么,我們該如何檢測細菌內毒素呢?
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,當細菌死亡或自溶后便會釋放出內毒素。是G-菌細胞壁個層上的特有結構,內毒素為外源性致熱原,它可激活中性粒細胞等,使之釋放出一種內源性熱原質,作用于體溫調節(jié)中樞引起發(fā)熱。
檢測細胞培養(yǎng)瓶中是否含有細菌內毒素可以聽過內毒素檢測鱟試劑盒來檢測,它是利用人工合成的顯色基質使鱟試劑產(chǎn)生的顯色反應定量檢測內毒素。在適宜的條件下(溫度,pH值及無干擾物質),細菌內毒素激活C因子,引起一系列酶促反應,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質,使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺(pNA,λmax = 405nm) 。在一定時間內,pNA的生成量與細菌內毒素濃度成正相關,據(jù)此,可以定量供試品的內毒素濃度。
以上是檢測細胞培養(yǎng)瓶中細菌內毒素的方法,確保耗材無細菌內毒素是衡量其質量的一項重要指標,也是保證后期細胞正常生長的關鍵因素。
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