我們在使用細胞工廠時對生長到一定程度的細胞就到了收獲的時候了,這時候就需要借助胰酶對細胞工廠上的細胞進行消化后再收獲一般使用trypsin-EDTA 濃度為 0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na 或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。
首先我們先介紹一下胰酶:胰酶儲存的環(huán)境一般在–20°C左右,我們在解凍胰酶的普遍是在 4°C 的環(huán)境中進行,我們在第一次開瓶后應(yīng)立即將胰酶少量分裝于無菌試管中,并保存于 –20°C環(huán)境中,這種操作是將反復冷凍解凍造成 trypsin 之活性降低的影響減少,而且這樣的操作流程也會降低污染的可能。
而我們在細胞工廠培養(yǎng)細胞時胰酶配制也是很重要的一件事濃度過高時,是很容易造成我們細胞培養(yǎng)基中細胞碎片增多、一些黑渣子的增多,所以我們在常規(guī)細胞傳代時建議用 0.05% 的胰酶進行消化,對于難消化的細胞可采用 0.25% 胰酶進行消化,而細胞工廠的細胞密度過高超過 80% 時,我們可以采用分步消化法。而溶度過低時消化不足則細胞難以從瓶壁上吹下,反復吹打則會損傷細胞活性。因此,控制胰酶消化時間尤為重要。
當然我們在使用細胞工廠或其他細胞培養(yǎng)耗材時不同細胞對胰酶消化液的敏感性不同,細胞對胰酶消化的時間也會有差異。對于新購買的細胞,富道細胞建議我們先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間,可每隔 1 分鐘鏡下觀察細胞是否變圓,記錄最佳消化時間,下一次操作時參考之前的記錄來控制時間即可。
這就是富道細胞對細胞工廠培養(yǎng)細胞時胰酶配制時的一些說明,希望可以對各位細胞培養(yǎng)的時候能起到一定的幫助。