我們在使用細胞工廠等細胞培養(yǎng)耗材進行細胞培養(yǎng)時,如果出現(xiàn)細胞污染的情況下,我們這段時間的努力可能都會白費。那我們如何分辨這些污染的情況呢?今天富道細胞就跟大家分享一下。
細菌污染:肉眼可見細胞工廠底部有一層白色的薄膜,培養(yǎng)基渾濁變酸變黃呈云霧狀,鏡下觀察有自由行動的顆粒,細胞狀態(tài)差、基本死亡、看不到正常細胞形態(tài)。在高倍鏡下看到的有可能是一些細胞狀態(tài)不好分泌的雜質,也有些是細胞凋亡后的碎片。通常凋亡細胞的裂解產物對正常細胞生長是不利的(比如溶酶體的釋放),所以有的話建議通過換液的方式去掉。這些小黑點會有布朗運動,看上去跟細菌一樣會動,區(qū)別在于細菌的形態(tài)是每個點都幾乎一樣,而且能看到某些黑點會向某一方向移動較長的距離(桿菌的話在高倍鏡下常有2根短桿狀的菌體黏在在相互扭動,有臭味),而碎片一般是在原地來回反復地振蕩,而且數(shù)量也不會增多。培養(yǎng)基是否渾濁和細菌密度有關,污染初期數(shù)量不多是不渾濁的。
霉菌污染:培養(yǎng)液清亮,肉眼看到培養(yǎng)瓶有團塊的霉菌斑/菌落,可見絮狀漂浮物,顯微鏡下看到霉菌的菌絲,呈細束纖維狀或較為密集的孢子團塊,呈細絲竹節(jié)管狀;污染初期pH穩(wěn)定,嚴重后迅速升高。
酵母菌污染:肉眼看到培養(yǎng)瓶顏色變得渾濁,顯微鏡下看到小的酵母顆粒。(注:真菌通常傾向于聚集生長,在培養(yǎng)體系內形成“毛茸茸”的菌落,或絲狀菌體,但一般不出現(xiàn)培養(yǎng)基變酸等現(xiàn)象。)
白色念珠菌:污染肉眼看到培養(yǎng)瓶顏色變得渾濁,顯微鏡下看到一串一串的白色念珠菌。
支原體污染:細胞會長的慢,量少時培養(yǎng)基不會渾濁,對細胞影響較小,但支原體增殖速度快,逐漸影響細胞生長,細胞邊緣不清晰,培養(yǎng)基逐漸渾濁。支原體在沒做特殊處理的情況下無法用普通光鏡觀察到,只能買個支原體檢測試劑盒定期檢測一下/支原體抑制劑處理、日常預防。
真菌污染:細胞培養(yǎng)基清亮不變色,鏡下可見毛毛的白色絲狀漂浮物,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不像細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
上一篇: 細胞工廠預防細胞污染及補救方法