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我們在發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法，先把每種試劑：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板，放在培養(yǎng)箱過夜/2天（因為4℃冰箱溫度低不利于細菌的生長，拿來涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細菌污染也不能排除污染，因為細菌會依附在細胞上，空培沒有細胞，細菌又很小很難看到，所以最長可放置7天，若7天后還沒有污染跡象就可以排除！）。

之后進行離心：12000rpm、1min，棄去上清留下少許液體重懸沉淀后涂片、風(fēng)干后滴加結(jié)晶紫染液1min后用少量慢速清水在上面沖洗3次（不要對著涂片的位置沖?。谖?個不同位置各壓干一次后滴一滴香柏油到載玻片后在油鏡下觀察有無細菌。鏡下形態(tài)規(guī)則、兩頭染色深中間染色淺的長桿狀是桿菌；形態(tài)是正圓光滑的球狀、整個球形染色深的是球菌（大小都不是很大的），其它形態(tài)不規(guī)則、過大/過小、一大片的可能只是雜質(zhì)和細胞膜碎片等等。此方法即為革蘭氏染色法，是最常用的細菌染色法，結(jié)晶紫也可稱之為龍膽紫，是堿性染料。當(dāng)它溶解后，可以被活細胞攝入，同時可以使DNA、蛋白質(zhì)、脂肪著色。染色顯示細胞核（與核酸結(jié)合）呈藍色，細胞質(zhì)呈粉紅色。肉眼顯示整個細胞呈深藍色。