細(xì)胞空泡化是指變性細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡(水泡),細(xì)胞呈蜂窩狀或網(wǎng)狀的現(xiàn)象。變性嚴(yán)重者,小水泡相互融合成大水泡,細(xì)胞核懸于中央,或被擠于一側(cè),細(xì)胞形體顯著腫大,胞質(zhì)空白,外形如氣球狀。
細(xì)胞空泡化通常伴隨著細(xì)胞死亡和細(xì)胞功能狀態(tài)的改變,許多自然或者人工合成的化合物以及被細(xì)菌或者病毒感染后均會(huì)出現(xiàn)不可逆的胞質(zhì)空泡化,因此出現(xiàn)這種情況,細(xì)胞便不可再用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中。
細(xì)胞工廠出現(xiàn)空泡化的原因及解決辦法
細(xì)胞老化:原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況,這是因?yàn)橛行┘?xì)胞傳代次數(shù)過多,處于終末分化狀態(tài),不會(huì)再分裂,時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)空泡化而死亡。
正確做法:原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過高。
pH變化:由于培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、儲(chǔ)存不當(dāng)、血清質(zhì)量不合格等原因,引起的滲透壓與pH值發(fā)生改變。
正確做法:更換新鮮培養(yǎng)液調(diào)整到合適的pH值,再進(jìn)行培養(yǎng)。
操作不當(dāng):胰酶消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損,以及吹打時(shí)力氣過大產(chǎn)生的大量氣泡長(zhǎng)期存在于培養(yǎng)液中也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的空泡化。
正確做法:選用合適的胰酶濃度,控制好消化時(shí)間。操作時(shí)避免吹打太過用力,如果出現(xiàn)了大量氣泡,可將氣泡去除后再培養(yǎng)。
細(xì)胞自噬:細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng)導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬也會(huì)形成空泡化,但是這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的,只有在電鏡下才能觀察到。
正確做法:要保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)充足,可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。
細(xì)胞污染:一些細(xì)胞出現(xiàn)空泡化,如果繼續(xù)培養(yǎng),空泡范圍會(huì)擴(kuò)大,即使傳代后也如此,出現(xiàn)這種情況,細(xì)胞基本無(wú)法挽救。后來(lái)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),此種細(xì)胞存在支/衣原體的感染。
正確做法:嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作,操作時(shí)要規(guī)范,減少污染的可能性。
這就是在細(xì)胞工廠培養(yǎng)過程中細(xì)胞空泡化及解決辦法。