首先我們需要明確一點,細胞工廠中如果出現(xiàn)抱團情況不一定代表生長不好。如果輪廓清晰,可以清楚地看到一個個細胞,說明細胞正在分裂。然而,大部分細胞抱團都表示細胞的生長出現(xiàn)了問題,其原因可能來自以下幾個環(huán)節(jié):
細胞消化:細胞是非常脆弱的,如果消化時吹打太用力、消化液太強或有毒性等容易導致細胞死亡,進而釋放DNA,形成黏性的細胞團。細胞消化不完全,細胞間的連接沒有分開;細胞消化過度,圓形的細胞容易聚堆,再分開很困難。
操作建議:消化細胞的過程要輕柔,切忌用力拍打培養(yǎng)瓶的側壁;對于貼壁較牢的細胞,建議分批多次消化,降低胰酶對細胞的損傷。培養(yǎng)前充分了解細胞的特性,確定細胞的最佳消化時間。
細胞傳代:細胞傳代時吹打不均勻,沒有將細胞團吹散;細胞離心速度過大或者離心時間過長;傳代時間把控不當,細胞長的太滿才進行傳代操作。
操作建議:消化前加入適量緩沖液對細胞進行清洗,清除死亡的細胞團和部分堆疊雜質;確定細胞正確的離心條件,嚴格按條件執(zhí)行;根據(jù)不同細胞的生長周期,在細胞匯合度達到80%~90%就可以進行傳代。
細胞接種:細胞轉移至培養(yǎng)瓶時分布不均勻,或者細胞接種密度過高。
操作建議:細胞轉移至培養(yǎng)瓶后要進行搖勻操作,放置的時候注意平衡。接種細胞前計數(shù),按照合適的密度進行接種。
細胞狀態(tài)不好:如果細胞本身的狀態(tài)不好,或者已經(jīng)發(fā)生老化,也容易造成細胞抱團生長。
操作建議:注意觀察細胞狀態(tài),及時換液或者傳代。
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