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今天富道細(xì)胞來跟大家分享一下常見細(xì)胞中的HepG2細(xì)胞用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)的情況。該細(xì)胞來源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。模式染色體數(shù)為55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。目前尚未證明該細(xì)胞中有HBV基因組。它的培養(yǎng)環(huán)境分為：ATCC：90% MEM+10% FBS

今天富道細(xì)胞來跟大家分享一下細(xì)胞工廠中的黑膠蟲污染：目前關(guān)于它的本質(zhì)還說法不一，要在高倍鏡下才能看到，培養(yǎng)基內(nèi)有能動(dòng)的小黑點(diǎn)、高倍鏡下可見黑色小蟲游走、會(huì)穿梭的黑色點(diǎn)狀顆粒。黑膠蟲污染后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)差、低倍下呈黑色點(diǎn)狀、高倍下做布朗運(yùn)動(dòng)、培養(yǎng)基不渾濁、與細(xì)胞數(shù)量成反比。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)總會(huì)遇到一些特殊情況而養(yǎng)不好細(xì)胞，今天富道細(xì)胞就來跟大家分享一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢應(yīng)該怎么辦。接種量太少。細(xì)胞長(zhǎng)得太滿會(huì)有接觸抑制，而細(xì)胞接種濃度低，也會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖較慢。一般情況下，細(xì)胞長(zhǎng)至80-90%可進(jìn)行傳代，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)得不太滿時(shí)進(jìn)行了傳代，會(huì)使得細(xì)胞接種濃度太低，可能導(dǎo)致細(xì)胞自分泌的物質(zhì)濃度減少，造成生細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)最怕出現(xiàn)的情況可能就是細(xì)胞培養(yǎng)瓶的發(fā)現(xiàn)了污染了，今天富道細(xì)胞來跟大家分析一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)的污染情況細(xì)胞房要保證干燥整潔，不然很容易染菌。真菌污染后，培養(yǎng)液清亮，培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)絲狀物，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。一旦發(fā)現(xiàn)真菌污染，可能導(dǎo)致整個(gè)培養(yǎng)箱中的細(xì)胞受到污染。需要徹底清理打掃培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、水浴鍋、細(xì)胞房等。

我們?cè)诎l(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法，先把每種試劑：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板，放在培養(yǎng)箱過夜/2天（因?yàn)?℃冰箱溫度低不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，拿來涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細(xì)菌污染也不能排除污染，因?yàn)榧?xì)菌會(huì)依附在細(xì)胞上，空培沒有細(xì)胞，細(xì)菌又很小很難看到，所以最長(zhǎng)可放置7天，若7天后還沒有污染跡象就可以排除?。?。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，如果出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況下，我們這段時(shí)間的努力可能都會(huì)白費(fèi)。那我們?nèi)绾畏直孢@些污染的情況呢？今天富道細(xì)胞就跟大家分享一下。

我們之前介紹了細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)常見的污染，今天富道細(xì)胞就來跟大家說一下細(xì)胞工廠預(yù)防細(xì)胞污染及補(bǔ)救方法。我們應(yīng)對(duì)細(xì)胞工廠內(nèi)出現(xiàn)污染最好對(duì)策是預(yù)防，這一點(diǎn)是毋庸置疑的。所以我們?cè)谂囵B(yǎng)時(shí)細(xì)胞要勤快，平時(shí)所用到的一次性耗材不可重復(fù)使用，使用輔助的器皿等要及時(shí)高壓滅菌，滅菌后超過一周未使用也應(yīng)重新滅菌。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)都有可能會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染富道細(xì)胞總結(jié)了一些常見細(xì)胞工廠的分類它們分別為：細(xì)菌污染、真菌污染、霉菌污染，支原體污染。細(xì)菌污染一般是芽孢桿菌、葡萄球菌造成的，污染的主要特征為細(xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材中培養(yǎng)基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細(xì)胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下可見桿狀或球狀的細(xì)菌在培養(yǎng)基中游動(dòng)（與細(xì)胞碎片的布朗運(yùn)動(dòng)明顯不同）。需注意的是，在污染初期，細(xì)菌常成群存在，不一定會(huì)有明顯的運(yùn)動(dòng)，此時(shí)需引起警惕。

我們立即棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，以PBS潤(rùn)洗2~3次，加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時(shí)棄去胰酶，加入PBS輕輕潤(rùn)洗1遍； 在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入20×雙抗，浸泡細(xì)胞3~5min，棄去雙抗，并加入新鮮的完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）培養(yǎng)12h；12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤(rùn)洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基（含10×雙抗），傳代時(shí)以較小轉(zhuǎn)速離心（如平時(shí)以1000r/min離心，則可降為800~900r/min離心），仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞搖瓶培養(yǎng)一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。

我們是使用細(xì)胞工廠這種大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)耗材時(shí)是進(jìn)行的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，那么如果出現(xiàn)貼壁細(xì)胞不貼壁了我們?cè)撛趺醋瞿?？今天富道?xì)胞來跟大家分享一下細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不貼壁的六種解決方案：

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠時(shí)對(duì)生長(zhǎng)到一定程度的細(xì)胞就到了收獲的時(shí)候了，這時(shí)候就需要借助胰酶對(duì)細(xì)胞工廠上的細(xì)胞進(jìn)行消化后再收獲一般使用trypsin-EDTA 濃度為 0.25％ trypsin-0.53 mM EDTA.2Na 或0.05％trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。首先我們先介紹一下胰酶：胰酶儲(chǔ)存的環(huán)境一般在–20°C左右，我們?cè)诮鈨鲆让傅钠毡槭窃?4°C 的環(huán)境中進(jìn)行，我們?cè)诘谝淮伍_瓶后應(yīng)立即將胰酶少量分裝于無菌試管中，并保存于 –20°C環(huán)境中，這種操作是將反復(fù)冷凍解凍造成

我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)出現(xiàn)的問題，無非是細(xì)胞出現(xiàn)污染和細(xì)胞本身出現(xiàn)了問題，我們?cè)谥暗奈恼轮兄v述了細(xì)胞培養(yǎng)過程出現(xiàn)污染的情況，今天富道細(xì)胞來跟大家介紹一下細(xì)胞本身的兩個(gè)問題和解決辦法。

細(xì)胞工廠是一種大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)容器，它采用多層結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，節(jié)省廠房空間，在生物制藥、疫苗生產(chǎn)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。在其實(shí)不止應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞，還可用于病毒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，在溶瘤病毒療法中也用到了這種細(xì)胞培養(yǎng)耗材。

血清是細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它為細(xì)胞提供各種生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白，對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到保護(hù)作用。PETG血清瓶是儲(chǔ)存血清的專用包裝容器，有時(shí)候我們會(huì)發(fā)展在瓶子內(nèi)部有一些沉淀物質(zhì)，這些物質(zhì)主要是磷酸鈣或者纖維蛋白。

細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞搖瓶由PC或PETG原料生產(chǎn)而成，作為一種細(xì)胞培養(yǎng)容器，其生產(chǎn)原料直接關(guān)系到成品的質(zhì)量，進(jìn)而會(huì)影響到后期的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。因此，要對(duì)這種耗材做溶出物試驗(yàn)，以確保原料的安全性。